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Das einst so mächtige Rom liegt in Trümmern. In der Stadt herrschen Elend und Zerfall und ihre Bewohner vegetieren im Schatten der mächtigen Borgia-Familie. Die letzte Hoffnung der ewigen Stadt ist nun Ezio Auditore, der Meisterassassine. Doch ihn erwartet ein erbarmungsloser Gegner. Cesare Borgia, ein Mann der noch ruchloser und brutaler vorgeht als sein Vater der Papst, wird keine Ruhe geben, bevor er nicht ganz Italien unter sein Joch gezwungen hat. In Zeiten wie diesen ist Verschwörung eine alltägliche Waffe, sogar in den Reihen der Bruderschaft der Assassinen.